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柑普提取物对和肿瘤细胞系的抗增殖作用

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关键词:

摘要：

俞乐安,肖遂,黄亚辉,等.柑普提取物对HepG2和SGC-7901肿瘤细胞系的抗增殖作用[J].现代食品科技,2020,36(7):42-49

YU Le-an, XIAO Sui, HUANG Ya-hui, et al. The antiproliferative activities in ganpu tea on HepG2 and SGC-7901 tumor cell lines [J].Modern Food Science and Technology, 2020, 36(7): 42-49

柑普茶是一种将柑橘果肉掏空，内部填塞普洱茶，后经日晒风干的复合茶类[1]。柑普茶的干燥工艺有别于其他茶类的快速高温干燥方式，以日光下的缓慢氧化为主，也带动了其内含物质，主要是酚类的缓慢热降解。柑普茶的原料为新会柑橘皮与云南普洱茶。柑橘种类繁多，以新会地区的柑橘皮制品为品质最佳，由新会柑橘制得的新会陈皮也是中国地理标志产品[2]。柑橘皮经日晒风干、陈化一系列工艺后，即成为陈皮。中医将陈皮入药，具有促消化，抗心脑血管疾病的功能[3,4]。普洱茶的主要产区是云南，以大叶种晒青绿茶为原料，主要活性成分为多酚类物质，以儿茶素、没食子酸与茶色素为主[5]。柑普茶结合原料的特点与功能，口感醇厚带柑橘香，迅速在市场上流行。

柑普茶的主要活性物质是儿茶素、咖啡碱、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素等[6,7]，兼具普洱茶与柑橘皮的香气成分，其挥发性成分主要有烯烃类、酯类、醇类等[8]。作为饮料，无论是茶、柑橘皮，还是柑普茶，水溶性物质均可直接作用于人消化道细胞。其中，世界范围内，中国胃癌调整死亡率居于首位，90年代，胃癌调整死亡率男性增长11.0%，女性增长6.3%[9]。同时，也有报道指出柑橘中提取的黄酮类化合物（主要物质为柚皮苷，含量为 2.99%；橙皮苷，含量为2.10%）通过抑制p-Akt途径诱导HepG2细胞系的细胞凋亡，进而抑制其增殖[10]，该抑制活性可能与其α-环甲氧基化的结构有关[11]。尽管，柑普茶兼具普洱茶的酚类物质与柑橘皮的黄酮类物质，但迄今为止，除了对柑普茶的橙皮苷、儿茶素与挥发性成分的研究外[6-8]，还没有对其加工前后的成分变化与活性的相关研究。因此，有必要对柑普茶加工工艺对其内含物质变化，与其对肿瘤细胞抑制活性进行研究。本实验以简单高效的高效液相色谱法为主要研究手段，采用新会柑皮和云南生普为原料加工而成并经两年存放的柑普茶及其原材料为研究材料。将柑普茶成品的柑橘皮部分与普洱茶分开，分别测量其内含物质，对比分析柑普茶原料与成品之间差异。选取陈皮与普洱茶活性较好的肿瘤细胞HepG2与SGC-7901，探究柑普茶及其原料对两种肿瘤细胞的抑制活性差异，选取其中抑制活性较好的 HepG2细胞系进行细胞周期与凋亡的分析，旨在阐明柑普茶加工工艺对其主要活性物质的影响及其对肿瘤细胞抑制作用，为科学饮用、加工柑普茶提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

经历两年存放的柑橘皮、普洱茶、柑普茶中剥出茶（以下简称剥出茶）、柑普茶中剥出柑橘皮（剥出皮）和柑普茶，均购于云鼎柑普有限公司；儿茶素单体（CG，EGC，C，EGCG，EC，GCG，ECG，CG）标准品、橙皮苷标准品、川陈皮素标准品、7-甲氧基黄酮标准品、橘皮素标准品、辛弗林标准品，均购于美国Sigma公司；异丙醇，十二烷基苯磺酸钠，磷酸，三氟乙酸（AR级）均购于天津科密欧化学试剂有限公司；甲醇（HPLC级），购于美国ThermoFisher公司。实验室自制：1640高糖培养基，胎牛血清，0.25%胰蛋白酶，50 μg/mL青霉素和50 μg/mL链霉素，均购于美国Glibco公司；二甲基亚砜（DMSO）国产分析纯，购于上海沪试公司；四甲基偶氮唑盐（MTT）购于美国Sigma公司，配制成5 mg/mL的原药贮存液，-20 ℃保存；SGC-7901人胃癌细胞株和HepG2肝癌细胞株，均购于American type culture collection；临使用时以1640，购于美国 Glibco公司（完全培养基稀释）；Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒，凯基生物。

1.2 仪器与设备

酶标仪，美国Thermo公司产品；超净工作台，上海瑞净智化设备有限公司产品；倒置相差显微镜购自日本Olympus公司；真空冷冻干燥机，上海源起有限公司；旋转蒸发仪，上海亚荣化学仪器厂；高压蒸汽灭菌锅，上海申安医疗设备厂；离心机，-80 ℃低温冰箱，美国赛默飞世尔科技公司；96孔板，美国Corning公司；高效液相色谱仪，美国Aglient公司；分光光度计，流式细胞仪（Guava easy Cyte TM）Merck。

1.3 柑普茶及其原料体外抑制肿瘤细胞活性测定

1.3.1 柑普茶生晒与存放过程

生晒：样品均摊在竹制篾子，置于室外，阳光直射区域，15 d，时间从2016年10月16日至同月10月 31日。温度维持在 18～27 ℃，湿度维持在75%～85%。

文章来源：《肿瘤学杂志》网址: http://www.zlxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0312/400.html